簡要描述:Western一抗二抗去除液(中性)又稱膜再生液或Western抗體洗脫液(Stripping buffer),用于Western中轉(zhuǎn)移了蛋白的膜的重復(fù)利用。在Western中完成了一抗二抗結(jié)合和后續(xù)的化學(xué)發(fā)光檢測后,有時還需要檢測GAPDH、β-actin等表達(dá)量相對穩(wěn)定的管家蛋白或其它蛋白作為參照。
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Western一抗二抗去除液又稱膜再生液或Western抗體洗脫液(Stripping buffer),用于Western中轉(zhuǎn)移了蛋白的膜的重復(fù)利用。在Western中完成了一抗二抗結(jié)合和后續(xù)的化學(xué)發(fā)光檢測后,有時還需要檢測GAPDH、β-actin等表達(dá)量相對穩(wěn)定的管家蛋白或其它蛋白作為參照。Stripping buffer可以洗脫一抗二抗,非常方便地重新利用使用過的膜,檢測其它蛋白。 Stripping buffer多次重復(fù)使用同一張膜,會導(dǎo)致蛋白信號的減弱不宜重復(fù)利用膜,一般可以利用3-5次。
通過使用一抗二抗去除液,充分去除一抗二抗,可以非常方便地重新利用使用過的膜檢測其它蛋白。和重新跑一個 SDS-PAGE 膠相比,不僅省時省力,而且可以消除重新上樣而帶來的誤差,使可比性更強。
Western 一抗二抗去除液(中性)主要在去除結(jié)合的一抗二抗的原理方面略有不同。分別依靠去垢劑、弱堿性、堿性、還原劑、螯合劑、鹽濃度以及一些特殊試劑等的不同組合來解除一抗二抗的結(jié)合,同時又不會導(dǎo)致轉(zhuǎn)移到膜上的蛋白的損失。
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