WB常用試劑使用可逆染色劑例如麗春紅S檢測轉膜效果，檢查轉膜操作是否正確。PVDF膜需預先浸在甲醇中，然后浸到轉移緩沖液中。代替5%脫脂奶粉，使用含0.5%脫脂奶粉或無脫脂奶粉的抗體稀釋液，或更換封閉劑，減少封閉時間。使用新鮮一抗，重復使用有效濃度會降低。在孵育和洗滌液中加入溫和去污劑如吐溫-20。脫脂奶粉含有酪蛋白，該蛋白本身就是一種磷酸化蛋白，會結合磷酸化特異性抗體而易產生高背景。使用BSA代替奶粉作為封閉劑。