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細(xì)胞因子相關(guān)問(wèn)題,千萬(wàn)別忽視!

更新時(shí)間:2023-08-18      點(diǎn)擊次數(shù):907

細(xì)胞因子(cytokine,CK)是免疫原、絲裂原或其他刺激劑誘導(dǎo)多種細(xì)胞產(chǎn)生的低分子量可溶性蛋白質(zhì),具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫、血細(xì)胞生成、細(xì)胞生長(zhǎng)以及損傷組織修復(fù)等多種功能。


absin細(xì)胞因子


細(xì)胞因子具有以下作用特點(diǎn):


多向性和靶向性:一種細(xì)胞因子可由多種細(xì)胞產(chǎn)生,作用于不同的靶細(xì)胞。例如,IL-5既可以來(lái)源于Th2細(xì)胞,也可以來(lái)源于肥大細(xì)胞,既能活化B細(xì)胞增殖,又能促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞分化、成熟,

即時(shí)性:基本不儲(chǔ)存,隨時(shí)產(chǎn)生并發(fā)揮作用。

局部性:通常以自分泌或者旁分泌的形式作用于周圍細(xì)胞。

相互協(xié)調(diào):以網(wǎng)絡(luò)形式發(fā)揮作用,不同細(xì)胞因子間相互抑制或促進(jìn)。

多重調(diào)節(jié):發(fā)揮的效應(yīng)與細(xì)胞因子濃度、靶細(xì)胞類型、其他細(xì)胞因子種類以及種屬有關(guān)。


常見(jiàn)細(xì)胞因子的作用:



名稱

功能

FGF

堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子,bFGF,F(xiàn)GF basic 或 FGF 2 屬于一個(gè)大的 FGF 蛋白家族,后者與包括增殖、生長(zhǎng)和分化的細(xì)胞發(fā)育的許多方面有關(guān)。FGF-basic 是一種維持胚胎干細(xì)胞在培養(yǎng)中保持未分化狀態(tài)的關(guān)鍵成分。

IL

IL是一類能夠雙向調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的細(xì)胞因子家族,主要參與免疫細(xì)胞的分化和激活。IL可劃分為IL-1細(xì)胞因子家族、共γ鏈細(xì)胞因子家族、IL-10細(xì)胞因子家族、IL-12細(xì)胞因子家族等;

EGF

表皮生長(zhǎng)因子,是一種有效的促有絲分裂因子,在體內(nèi)和體外的生長(zhǎng)、增殖和各種表皮和上皮組織  和細(xì)胞培養(yǎng)中的一些成纖維細(xì)胞中起重要作用。EGF 產(chǎn)生的失調(diào)與某些癌癥的生長(zhǎng)和進(jìn)展有關(guān)。

INF

干擾素,具有抗病毒、抑制細(xì)胞增殖、調(diào)節(jié)免疫及抗腫瘤作用。






由于天然的細(xì)胞因子表達(dá)量低,分泌具有短時(shí)自限性,難以收集提純,一般通過(guò)蛋白重組技術(shù)獲得,即先用基因克隆或化學(xué)合成技術(shù)獲得目的基因,連接到適合的表達(dá)載體,導(dǎo)入到特定的宿主細(xì)胞,利用宿主細(xì)胞的遺傳系統(tǒng),表達(dá)出有功能的蛋白質(zhì)分子。目前常用的有原核、真核、昆蟲(chóng)、哺乳動(dòng)物四種表達(dá)系統(tǒng)。



表達(dá)系統(tǒng)

特點(diǎn)

原核

產(chǎn)量高、蛋白常為包涵體,無(wú)翻譯后修飾,大分子蛋白表達(dá)困難

酵母

便于純化,部分翻譯后修飾有時(shí)出現(xiàn)蛋白切割問(wèn)題,糖基化不能滿足要求

昆蟲(chóng)

表達(dá)的大多數(shù)蛋白是可溶的,適合毒性蛋白,表達(dá)激酶等定位于細(xì)胞內(nèi)的真核蛋白

哺乳動(dòng)物

完善的翻譯后加工,活性接近天然蛋白,技術(shù)要求高,表達(dá)量低





選擇細(xì)胞因子時(shí)要注意以下幾個(gè)問(wèn)題:


1)細(xì)胞因子作為動(dòng)物免疫抗原進(jìn)行檢測(cè)類抗體的研究,蛋白純度需大于80%;若用于晶體及晶體結(jié)構(gòu)研究,蛋白純度需大于95%;
2)若需選擇不同種屬來(lái)源的細(xì)胞因子,則要判斷兩種種屬的細(xì)胞是否有交叉反應(yīng)活性。一般來(lái)說(shuō),不同種屬之間蛋白同源性(序列一致性)在80%以上的基本上可確定為有交叉活性;
3)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇想要的產(chǎn)品時(shí),我們還需要關(guān)注一下內(nèi)毒素的水平,特別是作為細(xì)胞添加物使用時(shí)。


許多老師在收到凍干粉之后由于保存或者溶解不當(dāng)造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想,小愛(ài)也遇到過(guò)很多老師詢問(wèn),產(chǎn)品室溫保存了兩個(gè)月還能用嗎?溶解不了怎么回事?細(xì)胞因子儲(chǔ)存和溶解其實(shí)都很簡(jiǎn)單,愛(ài)必信的細(xì)胞因子說(shuō)明書(shū)中給了明確標(biāo)注。


1、收到的凍干粉如何處理?

我們收到的凍干蛋白一般不會(huì)立即使用,這種情況下可放置-20℃儲(chǔ)存,室溫一般儲(chǔ)存三周左右,具體時(shí)間可參照說(shuō)明書(shū),請(qǐng)老師們妥善保存收到的產(chǎn)品。


2、凍干蛋白一般如何溶解?

敲黑板?。?!溶解前,一定要將凍干粉離心收集于離心管底部,不同的凍干蛋白需要的溶解劑不同,比如,abs04698重組人IL4使用中蒸餾水即可溶解, abs04177 IGF-I蛋白需溶解在500mM乙酸中,這是由PH和離子濃度能多種因素決定的,大家一定要仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū),此外,一定要溶解到說(shuō)明書(shū)推薦的濃度范圍,否則可能會(huì)造成活性減弱。


3、溶解方式

用槍頭輕輕捶打即可,對(duì)于相對(duì)較難溶解的,可以在低速搖床上靜止兩小時(shí)左右,切不可劇烈震蕩。



4、溶解后的蛋白如何儲(chǔ)存呢?

重組蛋白溶液一般可在4-7°C下儲(chǔ)存2-7天。避免反復(fù)凍融可將溶液分裝于聚丙烯管中(不會(huì)吸附蛋白),在<-20°C下穩(wěn)定保存3個(gè)月左右,適當(dāng)加入載體蛋白(BSA、HAS、FBS等)可減少管壁對(duì)重組蛋白的吸附損耗。


愛(ài)必信提供多種細(xì)胞因子,純度高、內(nèi)毒素含量低,可登錄了解更多信息。

小愛(ài)本期推薦:


貨號(hào)

品名

規(guī)格

abs04842

Mouse IL17A Protein

100μg/500μg/1mg

abs04176

Recombinant Human Epidermal Growth Factor/EGF

10μg/50μg/500μg/1mg

abs04045

Recombinant Human Interleukin-2/IL-2

10μg/50μg/100μg

abs04695

Recombinant Human Noggin

10μg/50μg/500μg/1mg

abs04398

Recombinant Human R-Spondin-1/RSPO1 (C-6His)

10μg/50μg/500μg/1mg

abs04697

Recombinant Mouse IL-4

10μg/50μg/100μg

abs00975

Recombinant Mouse IL-7

10μg

abs04100

Recombinant Mouse Interleukin-2/IL‐2

10μg/50μg/500μg/1mg

abs07000

Recombinant Mouse Interleukin-23/IL-23

10μg/50μg/500μg/1mg

abs04204

Recombinant Human Transforming Growth Factor β-1/TGFB1

10μg/50μg/1mg


好消息!Absin文獻(xiàn)獎(jiǎng)勵(lì)重磅升級(jí)!




Absin特色產(chǎn)品線:

WB相關(guān):ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠;IHC相關(guān):二抗試劑盒、組化筆;IP/CoIP試劑盒;激動(dòng)劑/抑制劑;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡試劑盒;呼吸爆發(fā)試劑盒;ELISA試劑盒;重組蛋白;抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對(duì)照抗體;定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...


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