裂解法包括化學裂解、酶裂解和機械裂解.化學裂解和酶裂解通常是比較溫和的方法,通常會很少使DNA 斷裂。
化學裂解和酶裂解法主要是裂解液處理法,主要根據不同的目的,裂解液的組成有所不同,主要有提取核酸和蛋白兩中.在提取RNA或DNA時,我們主要是要充分裂解細胞,得到更多的核酸;如果我們的目的是蛋白,那要根據蛋白的位置、特性等因素考慮裂解液。
蛋白定位 | 裂解液種類 |
全細胞 | NP-40 或RIPA |
細胞質(可溶性蛋白) | Tris-HCL |
細胞質(細胞骨架等不溶性蛋白) | Tris-Triton |
細胞膜 | NP-40 或RIPA |
細胞核 | RIPA |
線粒體 | RIPA |
1、去垢劑
SDS,NP-40,TritonX-100這三種去垢劑的作用強弱是不同的。
SDS屬于離子型去垢劑,厲害,基本可以把細胞*破掉,DNA會釋放出來,裂解液變得很粘稠。
NP-40是很溫和的去垢劑,1%濃度的基本可以破壞掉胞膜,而對核膜破壞的作用弱,結合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。
TritonX-100的能力介于NP40和SDS 之間,偏向于NP40,也是常用的細胞裂解液成分之一,在保護蛋白活性方面有一定作用(SDS基本會使蛋白變性失活)。
貨號 | 產品名稱 | 規格 |
abs9160 | NP-40裂解液 | 100ml |
abs9117 | SDS裂解液 | 100ml |
abs9149 | Triton X-100 | 100ml/500ml |
2、RIPA裂解液
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer),是一種傳統的細胞組織快速裂解液,對組織和細胞都有較好的裂解作用,主要是從動物組織和動物細胞中抽取的可溶性蛋白。RIPA的配方有很多種,根據其裂解強度的不同,大致可分為強、中、弱三類,應用上會有一些差異。
產品貨號 | abs9229 | abs9231 | abs9228 | abs9230 |
產品名稱 | RIPA裂解液(強) | RIPA裂解液(強)(不含抑制劑) | RIPA裂解液(中) | RIPA裂解液(弱) |
有效成分 | 1% Triton X-100,1%脫氧膽酸鈉,0.1% SDS | 1% Triton X-100,1%脫氧膽酸鈉,0.1% SDS | 1% NP-40,0.5%脫氧膽酸鈉,0.1% SDS | 1% NP-40,0.25%脫氧膽酸鈉 |
裂解強度 | 強 | 強 | 中 | 溫和 |
對膜蛋白的提取 | 優 | 優 | 良好 | 一般 |
對胞漿蛋白的提取 | 優 | 優 | 優 | 優 |
對核蛋白的提取 | 優 | 優 | 良好 | 較好 |
胞漿磷酸化蛋白的提取 | 優 | 優 | 優 | 優 |
核轉錄因子的提取 | 優 | 優 | 優 | 優 |
蛋白酶抑制劑 | 含有 | 不含 | 含有 | 含有 |
磷酸酶抑制劑 | 含有 | 不含 | 含有 | 含有 |
主要用途 | WB,IP | WB,IP | WB,IP | WB,IP,Co-IP |
貨號 | 產品名稱 | 規格 |
abs9228 | RIPA裂解液(中) | 100ml |
abs9230 | RIPA裂解液(弱) | 100ml |
abs9229 | RIPA裂解液(強) | 100ml |
abs9231 | RIPA裂解液(強)(不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑) | 100ml |
3、紅細胞裂解液
紅細胞裂解液是一種去除紅細胞簡便易行的方法,即用裂解液裂解紅細胞,利用細胞內外存在鹽離子濃度差而導致細胞膜脹破的原理來裂解無核紅細胞的,既不損傷有核細胞又能充分的去除紅細胞。主要用于經酶消化分散的組織細胞的分離純化,淋巴細胞的分離純化以及組織細胞蛋白與核酸提取等實驗中紅細胞的去除。
貨號 | 產品名稱 | 規格 |
abs9101 | 紅細胞裂解液 | 100ml/500ml |
abs9241 | 紅細胞裂解液,10X | 100ml |
abs9225 | 組織/細胞裂解液 (多因子檢測) | 100ml/500ml |
4、WB/IP 裂解液
免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液(Lysis Buffer for WB/IP Assays)是在非變性環境內裂解細胞的一款裂解液,適用于 PAGE,蛋白免疫印跡(Western Blot),免疫沉淀(IP),免疫共沉淀,ELISA 等實驗。經本品裂解收集的蛋白樣品,可使用增強型 BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定總蛋白濃度。由于本品含有較高濃度的去垢劑等干擾物質,不適合用 Bradford法來測定總蛋白濃度。
貨號 | 產品名稱 | 規格 |
abs9116 | 免疫印跡及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液 | 100ml |
abs9239 | 免疫印跡及免疫沉淀用裂解液(不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑) | 100ml |
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