快速內切酶DpnI

簡要描述：快速內切酶DpnI最適反應溫度下，將 1 μl DpnI 與 1 μg 超螺旋質粒DNA 共同溫育 4 h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，質粒 DNA 仍然處于超螺旋狀態(tài)。

產品型號：abs60210
廠商性質：生產廠家
更新時間：2024-07-08
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分子生物學

核酸提取/純化 qPCR系列 mRNA合成轉染產品分子克隆其它分子生物學試劑

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詳細介紹

品牌	absin	供貨周期	現貨
應用領域	化工,生物產業(yè),能源

產品描述

描述

愛必信的快速內切酶是一系列經過基因工程重組、能夠在5~15分鐘內精確完成DNA切割的限制性內切酶，適用于質粒DNA、PCR產物或基因組DNA等的快速酶切。愛必信的快速內切酶具有如下特點：5~15分鐘內即可完成酶切；共用一種酶切Buffer，大大簡化酶切反應體系；良好的酶活冗余度，輕松應對底物過量或困難模板酶切。此外，愛必信生物去磷酸化、連接試劑在配套的Buffer中具有100%活性，支持一管化反應，提升“酶切-修飾-連接"的體驗。
識別位點：
5'...G Am6 ↓T C...3'
3'...C T↑ Am6G...5'
同裂酶：MalI
注：同裂酶對于不同的甲基化修飾也許具有不同敏感性。

快速內切酶DpnI產品組分：

名稱	規(guī)格
DpnI	50 μl
10× Cut Buffer	1 ml
10× Cut Color Buffer	1 ml

使用方法

1. 快速內切酶DpnIDNA 快速酶切流程：
① 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應體系：

	質粒 DNA	基因組 DNA
ddH2O	15 μl	30 μl
10× Cut Buffer 或 10× Cut Color Buffer	2 μl	5 μl
底物 DNA	2 μl (up to 1 μg)	10 μl (5 μg)
DpnI	1 μl	5 μl
Total	20 μl	50 μl

② 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴；
③ 37℃溫育 15 min（質粒），或 30~60 min（基因組 DNA）；
④ 80℃溫育 20 min 即可使酶失活，停止反應（可選）。
2. 雙酶切或多酶切：
① 每種快速內切酶的用量為 1 μl，并根據需要適當擴大反應體系；
② 所有快速內切酶的體積總和不得超過總反應體系的 1/10；
③ 如果所用的幾種快速內切酶的最適反應溫度不同，應先以最適溫度低的酶開始酶切，再添加最適溫度較高的酶，在其最適反應溫度下進行酶切反應。
3. 適用于質粒的擴大反應體系：

DNA	1 μg	2 μg	3μg	4 μg	5 μg
DpnI	1 μl	2μl	3 μl	4 μl	5 μl
10× Cut Buffer 或 10× Cut Color Buffer	2 μl	2 μl	3 μl	4 μl	5 μl
Total	20 μl	20 μl	30 μl	40 μl	50 μl

注：如果總反應體系大于 20 μl，應適當增加溫育時間，盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。
不同 DNA 中的酶切位點數量：

λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	SV40	M13mp18/19	Adeno2
116	0	22	15	15	8	7	87

甲基化修飾影響：

Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
不能切割Dam-DNA	無影響	無影響	無影響	序列可能重疊剪切可能受影響

在不同反應緩沖液中的活性：

	Cut Buffer	Thermo Scientific FastDigest Buffer	NEB CutSmart® Buffer	Takara QuickCut™ Buffer
活性	100%	100%	100%	100%

儲存/保存方法

-20℃，有效期2年。

技術指標

建議反應條件：
1× Cut 緩沖液；
37℃溫育；
參照“DNA 快速酶切流程"配制反應體系。
失活條件：
80℃溫育 20 min。
質量控制：
功能活性檢測：
最適反應溫度下，在 20 μl 反應體系中，1 μl DpnI能夠在 15 min 內*消化 1 μg pUC19 DNA。
超長時間溫育檢測：
最適反應溫度下，將 1 μl DpnI 與 1 μg pUC19 DNA共同溫育 3 h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解，延時酶切可能出現星號活性。
酶切 - 連接 - 再酶切檢測：
最適反應溫度下，使用 1 μl DpnI 消化底物，回收酶切產物。在 22℃下使用適量 Fast T4 DNA Ligase 可以將酶切產物重新連接。將連接產物再次回收后，使用相同的內切酶可以重新切開連接產物。
非特異性內切酶活性檢測：
最適反應溫度下，將 1 μl DpnI 與 1 μg 超螺旋質粒DNA 共同溫育 4 h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，質粒 DNA 仍然處于超螺旋狀態(tài)。

溫馨提示：本產品僅作科研實驗使用，不支持臨床等研究

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快速內切酶DpnI

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