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文獻信息

題目：Regulation of the migration of colorectal cancer stem cells via the TLR4/MyD88 signaling pathway by the novel surface marker CD14 following LPS stimulation

雜志：Oncology Letters 27.2 (2024): 60.

作者：Li Y, Shi J, Liu Z, et al

圖 文獻引用產(chǎn)品信息

研究背景

結(jié)直腸癌(CRC)是全球癌癥相關(guān)死亡的主要原因之一，主要原因與CRC干細胞(CCSCs)引起的術(shù)后癌癥復發(fā)、轉(zhuǎn)移或癌細胞耐藥有關(guān)，CCSCs缺乏一致和可靠的標記物限制了它們在臨床實踐中的使用。為了啟動促炎反應，脂多糖(LPS)和CD14（單核細胞、巨噬細胞和中性粒細胞的一種特殊表面標志物）通過Toll樣受體4(TLR4)信號通路相互作用，此外，脂多糖通過TLR4信號通路促進結(jié)直腸癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移，CD14與腫瘤的復發(fā)、生長、轉(zhuǎn)移和治療耐藥有關(guān)，這與CSC的特征（如復發(fā)、生長、轉(zhuǎn)移和耐藥）是一致的，這表明CD14可能與CCSCs相關(guān)。

研究方法

本研究采用免疫熒光雙標記法檢測CD133和CD14，定量評估結(jié)直腸癌組織和癌旁組織石蠟包埋切片CCSCs中CD14的表達。隨后，從結(jié)直腸癌組織中提取CD14+細胞，通過分析增殖、腫瘤親和性和治療耐藥性來檢測其干性特征，以證實表型鑒定。此外，遷移的體外檢測能夠檢測CD14的功能。

研究結(jié)果

1、癌旁組織相比，所有結(jié)直腸癌組織中CD14和CD133共表達的陽性率均顯著升高。

圖 CD14在CD133標記的結(jié)直腸csc中表達

2、EdU和CCK-8檢測結(jié)果顯示結(jié)腸癌CD14+細胞表現(xiàn)出更強的增殖能力。

圖 結(jié)腸癌CD14+細胞表現(xiàn)出增強的增殖能力

（CCK-8購自愛必信abs50003 CCK-8試劑盒）

3、細胞克隆實驗表明，與CD14-細胞相比，CD14+細胞更大，核分裂增加，聚集成簇。用裸鼠異種移植實驗表明植入45天后，CD14+細胞組的腫瘤明顯大于CD14-細胞組。

圖 CD14+細胞在結(jié)腸癌中具有致瘤性

4、耐藥性分析。CD14+組和CD14-組細胞的IC50分別為2.554和17.02mg/L，表明與陰性組相比，陽性組的耐藥性增加。

圖 CCK-8測定5-FU對CD14+和CD14-細胞48h的IC50效應曲線

5、Transwell實驗結(jié)果顯示，與對照組相比，內(nèi)毒素組表現(xiàn)出更強的遷移能力，而內(nèi)毒素+中和抗體組的遷移能力比對照組更強（圖A）。創(chuàng)面愈合實驗表明，內(nèi)毒素組的細胞遷移能力明顯高于內(nèi)毒素+中和抗體組（圖B）。RT-qPCR結(jié)果顯示MyD88基因表達水平以內(nèi)毒素組最高（圖C），Western blotting顯示TLR4和MyD88蛋白的表達在內(nèi)毒素+中和抗體組和內(nèi)毒素組均顯著高于對照組，其中內(nèi)毒素組的增加更明顯（圖D）。

圖 內(nèi)毒素影響細胞遷移

（RIPA裂解液abs9229、彩色PAGE快速凝膠試劑盒(10%)abs9367、ECL化學發(fā)光檢測試劑盒abs920、 TLR4抗體abs132000、MyD88抗體abs135682、LPSabs47014848, 細胞快速RNA提取試劑盒 abs60027）

常規(guī)裂解液對比

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