一、概念：

細胞凋亡：由基因控制的細胞自主的有序的死亡，是高度調(diào)控的過程，故又稱為細胞的程序性死亡。

二、特征：

細胞壞死是病理狀態(tài)下由損傷因子誘導(dǎo)產(chǎn)生的自溶現(xiàn)象，表現(xiàn)為：細胞皺縮變小、質(zhì)膜起泡、染色體凝縮、細胞核碎裂、DNA片段化以及吞噬體最終吞噬細胞。

圖1 細胞凋亡與細胞壞死過程

三、檢測試劑盒

1、Annexin V/PI檢測試劑盒

根據(jù)細胞凋亡過程中的變化，可以通過多種途徑對其進行檢測，目前市面上常用的試劑盒包括一下幾種：

Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒（abs50001）

正常細胞中，磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，細胞發(fā)生凋亡最早期，PS由翻向外側(cè)，這一變化早于細胞皺縮、染色質(zhì)濃縮、DNA片斷化和細胞膜的通透性增加等凋亡現(xiàn)象。Annexin V與ps有高度親和力，因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種核酸染料, 它不能透過完整的細胞膜，但凋亡中晚期的細胞和死細胞由于細胞膜通透性的增加，PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時期的細胞區(qū)分開來。但由于Annexin V本身沒有熒光，因此需要偶聯(lián)熒光基團，以便被流式細胞儀檢測，通常會偶聯(lián)FITC、eGFP、AF488、APC等基團。

選擇原則：若細胞沒有自發(fā)熒光，可以選擇Annexin V-FITC/PI或Annexin V-eGFP/PI。這類試劑盒熒光光譜重疊較小，對實驗人員的技術(shù)要求相對較低。

如果細胞本身需要檢測綠色熒光，可以選擇Annexin V-APC/PI或者Annexin V-APC/7AAD組合的試劑盒。但APC和PI的熒光光譜有較大重疊，對檢測儀器和技術(shù)人員有較高要求，如果細胞本身需要檢測紅色熒光，則應(yīng)確認紅色熒光的激發(fā)光和發(fā)射光波長，如果與PI/7AAD的激發(fā)光和發(fā)射光均相似，則不能用這類試劑盒檢測該細胞的凋亡。

2、TUNEL細胞凋亡試劑盒

TUNEL細胞凋亡試劑盒（綠色熒光）abs50047

TUNEL染色熒光圖（綠色）

細胞發(fā)生凋亡時，會激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA，基因組DNA雙鏈或單鏈斷裂時會出現(xiàn)產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端，正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，3'-OH可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)的催化作用下，與488/Cy-dUTP結(jié)合，從而通過熒光顯微鏡或流式細胞儀直接進行凋亡細胞的檢測，這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標記法(Terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。

選擇指南：Tunel法可以對完整的單個凋亡細胞核或凋亡小體進行原位染色，可檢測出極少量的凋亡細胞，可用于檢測冷凍或石蠟切片中的細胞凋亡情況，也可檢測培養(yǎng)的貼壁細胞或懸浮細胞的凋亡情況。選擇性的檢測凋亡細胞，而非壞死細胞或因輻照和藥物治療而造成的DNA鏈斷裂的細胞。用流式細胞儀檢測或涂片后在熒光顯微鏡下觀察。

3、Caspase 3/7 活性檢測試劑盒

Caspase 3/7活性檢測試劑盒(Caspase 3/7 Activity Assay Kit)是采用分光光度法檢測細胞或組織裂解液中caspase 3/7酶活性或純化的caspase 3/7酶活性的試劑盒。Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一個在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 3是哺乳動物細胞中研究最多的caspase。 本試劑盒原理基于Caspase 3/7都可以催化底物Ac-DEVD-pNA產(chǎn)生黃色的pNA（對硝基苯胺），測定405nm附近pNA的吸光度。

4、線粒體膜電位檢測試劑盒

JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位△Ψm的理想熒光探針。可以檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時，JC-1聚集在線粒體的基質(zhì)中，形成聚合物，可以產(chǎn)生紅色熒光；在線粒體膜電位較低時，JC-1不能聚集在線粒體的基質(zhì)中，此時JC-1為單體，可以產(chǎn)生綠色熒光。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉(zhuǎn)變來檢測線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對比例來衡量線粒體去極化的比例。線粒體膜電位的下降是細胞凋亡早期的標志性事件。因此該試劑盒可以用于早期的細胞凋亡檢測。

*注：文中圖片來自網(wǎng)絡(luò)或參考文獻，僅供學習參考用

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