THP-1 為啥養著貼壁了?

THP-1 養貼壁了還能拯救嗎?

THP-1細胞很多貼壁的怎么處理啊？

THP-1復蘇后，養不起來咋辦？

THP-1聚團正常嗎？

THP-1已經養了一周了，還是大量聚團，數量還是沒那么多，能擴瓶嗎？

最近好多小伙伴咨詢 THP-1 細胞培養各種難題，問的最多的還是貼壁問題。通過經驗總結和資料查詢，今天給大家出一份培養攻略，希望幫到大家。

先做一個簡短介紹：THP-1 細胞系最初來自一位急性單核細胞白血病患者的血液，屬于懸浮細胞，有分化為多種巨噬細胞的能力，是各領域研究常用的細胞系之一。

表1 THP-1（人單核細胞白血病細胞）細胞基本信息

圖1 1640基礎培養基(abs9484)和胎牛血清(特級)(abs972)

圖2 THP-1（人單核細胞白血病細胞）

THP-1單核細胞正常形態為懸浮的體積較小、透亮的圓形細胞，少數聚團成葡萄狀，粒粒飽滿，輪廓清晰（如圖3）。該細胞在偏酸性環境中，生長更快，所以當培養基稍微變黃（呈橘紅色）時，是比較適合細胞生長的，此時補液或半換液即可；開啟后的1640培養基，長期放置pH會偏高，建議開封后一周內使用完畢。該細胞對血清要求高，血清質量差異可能引起細胞狀態變化，建議選用高質量的胎牛血清。

圖3 狀態良好的THP-1（人單核細胞白血病細胞）

首先，我們要討論的是THP-1貼壁問題。THP-1細胞培養過程中出現少量細胞貼壁屬于正常情況（如圖4），不需要擔心。可以輕吹收集細胞或者丟棄貼壁部分細胞。但如果當貼壁細胞比例高于20%，說明細胞生長環境有異常，這時候就需要排查培養箱溫度及CO₂濃度、培養基成分，以及培養器皿是否異常?？捎梅荰C處理過的培養瓶，不利于細胞貼壁。

圖4 部分貼壁的THP-1（人單核細胞白血病細胞）

然后我們要討論的是THP-1聚團問題（如圖5所示）。THP-1細胞在密度較稀時，有少量細胞聚團屬于正?，F象，不建議將聚團的細胞吹散，等待密度高時，細胞會自然分散開。當細胞密度高時，聚團細胞比例高于30%時，并且細胞團呈糜爛狀，細胞之間界限不清，胞體質膜有潰爛感，這種情況下的細胞聚團是異常的。若對細胞沒有做過任何實驗處理，可優先排查營養體系，比如更換血清品牌或增大血清比例（不超過20%）有助于解決聚團問題。

圖5 嚴重聚團的THP-1（人單核細胞白血病細胞）

最后我們要討論的是關于THP-1復蘇不起來怎么辦？（如圖6所示）該細胞對凍存密度有依賴，凍存密度建議5*10⁶-10⁷/ml；同時復蘇密度也有依賴性，建議不低于3*10⁶/ml。當細胞傳過幾次代，狀態較好時，傳代密度維持在5*10⁵/ml-10⁶/ml為宜，超過2*10⁶/ml則需要傳代。如有細胞碎片，待細胞密度增大后通過低速離心去除。

圖6 復蘇狀態很差的THP-1（人單核細胞白血病細胞）

本期講解就到這里了，如有細胞培養問題，歡迎掃碼加入我們微信群交流。

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