在樣本制備的過程中,往往會應用一些試劑(如多聚甲醛、福爾馬林等)對新鮮組織進行處理,這個過程可能導致抗原位點被封閉,為了避免影響后續免疫染色的效果,我們需要先對切片進行抗原修復。對于石蠟切片來說,抗原修復是必須的步驟,常用的方法有酶消化法和熱修復法。
1、酶消化法
作為最早的抗原修復方法,常用的消化酶有三:胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K。但酶的作用極易受溫度影響,如果消化不足,則無法充分暴露出抗原位點,過度的消化又會破壞組織結構,影響最后陽性信號的判讀,因此在后續的發展中,酶消化法漸漸被熱修復技術所替代,但對于個別抗原,如免疫球蛋白、補體,以及在甲醛固定、石蠟包埋的腎活檢中,酶消化法依舊不可替代。
2、熱修復法
抗原熱修復是采用高溫、高壓方法配合合適的抗原修復液,使得被固定液封閉的抗原位點重新暴露,提高抗體的陽性檢出率。
常用的抗原修復液有兩種:檸檬酸鈉緩沖液(pH=6)、EDTA緩沖液(pH=8或9),一般來說一抗的說明書都會寫明需要選擇哪種修復液。如果說明書沒有推薦,檸檬酸鈉緩沖液能夠適配大部分的抗體,EDTA緩沖液相對修復效果更強,但陽性增強的同時也會提高非特異背景,一些比較難表達的抗體可以選擇EDTA緩沖液。
熱修復方法 | 微波熱修復 | 水浴熱修復 | 高壓熱修復 |
操作 | 在染色盒中加入抗原修復液,放入切片,置于微波爐中高火煮沸,低火維持15min后取出染色盒,冷卻至室溫 | 在染色盒中加入抗原修復液,放入切片,置于水溶鍋中加熱,其間不斷用溫度計測其溫度,待抗原修復液的溫度達到有效溫度(92℃↑),維持40min后取出染色盒,冷卻至室溫 | 在染色盒中加入抗原修復液,放入切片,置于高壓鍋內加熱至飽壓后繼續加熱5min,關閉電源,10min后取出染色盒,冷卻至室溫 |
優點 | 加熱的時間和溫度都可以有所調整 | 溫和,均勻,不易脫片,對組織形態結構影響少 | 受熱均勻,暴露抗原位點效果好,受環境條件影響小,可重復性高 |
缺點 | 時間長,修復液容易蒸干,需要及時觀察補充;受熱容易不均勻,沸騰易導致脫片;不同微波爐功率有差異,難以標準化 | 需要較長時間;染色盒材料不同,熱傳導性不同,會影響加熱效果,容易出現抗原表達弱、陽性率低的結果 | 易導致脫片;使用高壓鍋要小心蒸汽燙傷,使用要規范謹防鍋內蒸汽過飽和引發事故 |
小愛溫馨提示,沒有哪一種抗原修復液或者修復方法能夠適配所有的抗體和樣本,最佳條件還是需要在摸索實踐中確定哦!
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分類 | 貨號 | 品名 | 規格 | 貨期 |
固定 | abs9179 | 4%多聚甲醛/通用型組織固定液 | 500ml | 現貨 |
抗原修復 | abs9249 | 檸檬酸鈉-EDTA抗原修復液(40×) | 100ml | 現貨 |
abs9207 | 冰凍切片快速抗原修復液(5×) | 100ml | 現貨 | |
abs9208 | 細胞爬片抗原修復液(1X) | 100ml | 現貨 | |
abs9247 | EDTA抗原修復液(50×) | 100ml | 現貨 | |
abs9342 | Tris-EDTA抗原修復液(10×,pH9.0) | 100ml | 現貨 | |
abs9248 | 檸檬酸鈉抗原修復液(50×) | 100ml | 現貨 | |
abs9336 | 胃蛋白酶抗原修復液 | 100ml | 現貨 | |
細胞通透(胞內指標) | abs9149 | Triton X-100/曲拉通X-100 | 100ml/500ml | 現貨 |
淬滅 | abs9333 | 過氧化物酶封閉液(H2O2法) | 100ml | 現貨 |
abs9152 | 吐溫-20 | 500ml/2.5L | 現貨 | |
封閉 | abs933 | Goat serum | 10ml/50ml | 現貨 |
abs935 | 驢血清 | 50ml | 現貨 | |
abs9157 | 牛血清白蛋白 (BSA) | 100g | 現貨 | |
一抗 | 多指標IHC專用一抗(CD3、CD8、CD4、FOXP3、KI-67......) | 1-2周 | ||
abs9299 | 一抗二抗稀釋液 | 100ml/1L | 現貨 | |
二抗 | 即用型二抗試劑盒(abs957、abs996、abs997、abs998) | 現貨 | ||
HRP二抗 | 現貨 | |||
顯色液 | abs9210 | DAB 顯色試劑盒(棕黃色,IHC) | 1kit | 現貨 |
abs9211 | DAB 顯色試劑盒(藍紫色,IHC) | 1kit | 現貨 | |
復染(可選) | abs9214 | 改良型Mayer's蘇木素染液 | 100ml/500ml | 現貨 |
封片(DAB顯色) | abs9177 | 中性樹膠 | 100ml | 現貨 |
緩沖液 | abs962 | 1×PBS緩沖液 | 500ml/500ml*10 | 現貨 |
abs952 | 10*TBST | 100ml/1L | 現貨 | |
abs9340 | PBST(1×,pH7.4) | 500ml | 現貨 | |
組化筆 | abs929 | PAP Pen 組化筆 | 1支 | 現貨 |
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