欧美激情在线看,国产成人黄网在线免,久久成人在线视频,制服丝袜护士久久久久久

全國服務咨詢熱線:

article技術文章
首頁 > 技術文章 > 類器官傳代培養全流程及答疑解惑

類器官傳代培養全流程及答疑解惑

更新時間:2022-11-30      點擊次數:1278

 

準備工作
1.儀器設備
CO2 培養箱、雙人單面超凈臺、倒置顯微鏡、臺式冷凍離心機、水浴鍋、水浴搖床,醫用冰箱、-80°冰箱、移液器(一套)。

2.試劑耗材
小腸類器官培養基、小腸類器官緩沖液、類器官傳代消化液、硫酸慶大霉素、雙抗、基質膠、60mm細胞培養皿、15ml離心管、1.5ml EP管若干、4度冰盒。

 

操作流程
1.類器官操作流程之——樣本準備
(1)移液器吸去培養基,每孔添加1-2ml 4℃類器官緩沖液B放置2min。


(2)移液搶輕柔吹打基質膠,收集在15ml離心管中,4℃靜置10min。(每6-8孔為一組)。



2. 
類器官傳代培養之——樣本消化

A:類器官數量不足或體積較小時: 離心5min棄去上清,添加適量小腸類器官緩沖液重懸移入1.5ml離心管,300g離心5min棄去液體進行第3步。

B:類器官數量較多或體積較大時:離心5min棄去上清,添加適量類器官傳代消化液D消化2-3min,添加小腸類器官緩沖液終止消化,離心5min棄去混合液,添加適量小腸類器官緩沖液重懸移入1.5ml離心管,300g離心5min棄去液體進行第3步。


3. 類器官傳代培養之——鋪板

類器官收集后,添加基質膠重懸,每孔25μl基質膠鋪在24孔細胞培養板中,放置培養箱中10-15min添加500μl小腸類器官培養基。



答疑解惑

 

Q1:類器官培養一代需要多長時間?

A:一般需要5-7天,長得快可3-5天。

Q2: 初始量樣本量10*5,活性大于90%,可以培養出多少類器官?

A:培養一代,一般是24孔板的10個孔。

Q3:原代培養中消化下來的細胞是只有干細胞嗎?

A:消化下來的細胞包含各個種類的細胞,但是能培養成類器官的只有成體干細胞和腫瘤干細胞,沒有干性的細胞在培養過程中不會增殖分化,養的過程會死掉。

Q4:想要CTC培養,需要多少樣本量呢?

A:至少50+個CTC,取樣時可以多取一些血,CTC細胞占比比較少。

Q5:類器官量多小的時候不需要加消化液?

A:一般是100um以下。

Q6:如果要做藥篩需要額外去除基質膠和培養基嗎?

A:和傳代培養鋪板一樣,藥用培養基稀釋就可以。

Q7:類器官培養一定需要基質膠嗎?

A:基質膠主要是為類器官提供支撐作用和營養物質,基質膠主要成分有laminin,collagen IV,heparan sulfate proteoglycans。

Q8:取材時為什么剔除脂肪組織?脂肪肝可以做類器官培養嗎?

A:脂肪組織影響后續消化分離得到的干細胞純度,脂肪肝也是可以做類器官培養的,消化前可以多清洗幾次,去掉表面脂肪。

Q9:類器官可以直接用細胞系培養嗎?

A:用細胞系培養的不能成為類器官,只能稱之為細胞球。

 
本期小愛推薦
類器官培養基試劑盒


貨號

品名

規格

abs9514

  Organotial小鼠腸類器官培養基試劑盒

1kit

abs9516

  Organotial小鼠肝類器官培養基試劑盒

1kit

abs9515

  Organotial小鼠肺類器官培養基試劑盒

1kit

abs9517

  Organotial小鼠胰腺類器官培養基試劑盒

1kit

abs9446

  Organotial乳腺癌類器官培養基試劑盒

1kit

abs9448

  Organotial子宮內膜癌類器官培養基試劑盒

1kit

abs9445

  Organotial結直腸癌類器官培養基試劑盒

1kit

abs9444

Organotial肝癌類器官培養基試劑盒

1kit

abs9443

Organotial肺癌類器官培養基試劑盒

1kit

abs9449

Organotial胃癌類器官培養基試劑盒

1kit

abs9447

Organotial胰腺癌類器官培養基試劑盒

1kit


 
相關產品推薦

貨號

品名

規格

周期

abs9490

  基質膠(標準型、含酚紅)

  1.5ml*8

  現貨

abs9491

  基質膠(標準型、無酚紅)

  1.5ml*8

  現貨

abs9492

  基質膠(高濃度、含酚紅)

  1.5ml*8

  現貨

abs9493

  基質膠(高濃度、無酚紅)

  1.5ml*8

  現貨

abs9494

  基質膠(低因子、含酚紅)

  1.5ml*8

  現貨

abs9495

  基質膠(低因子、無酚紅)

  1.5ml*8

  現貨

abs9496

  基質膠(IPS驗證無酚紅)

  1.5ml*4

  現貨

abs9497

  基質膠(高濃度、低因子、含酚紅)

  1.5ml*8

  現貨

abs9498

  基質膠(高濃度,無酚紅,低生長因子)

  1.5ml*8

  現貨


詳見:
類器官原代培養全流程

愛必信(上海)生物科技有限公司
地址:上海市浦東新區新浩路58號申江科創園18棟
郵箱:wulan@absin.cn
傳真:
關注我們
歡迎您關注我們的微信公眾號了解更多信息:
歡迎您關注我們的微信公眾號
了解更多信息