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免疫(共)沉淀——命中注定我愛你!

更新時間:2019-01-09      點擊次數:3481

愛必信absin免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒(貨號:abs955),現兩件6折100T僅需3000元!截止2019年1月11日。

免疫共沉淀(CoIP)是研究蛋白質相互作用的經典方法,其基于抗體和蛋白的特異性親和作用,通過捕獲與蛋白或抗原特異性結合的抗體,進而從復雜的樣品中捕獲及富集目標蛋白,同時可以測定與之相互作用的蛋白或其它生物大分子。

免疫沉淀(IP)則主要是利用抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法。

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(互作蛋白A和B,與對應抗體結合后,再與偶聯beads的Protein A/G結合)

免疫(共)沉淀(IP/CoIP)主要實驗流程見上圖:

(1)轉染表達目的蛋白的質粒后,后續主要是轉染表達目的蛋白的質粒(2)對樣本的裂解處理,(3)蛋白和抗體、珠子的孵育,(4)免疫復合物沉淀洗滌之后,(5)再進行后續分析,常規是做WB,也有用質譜分析的。

可以看出,CoIP本身的實驗流程并不復雜,只是為了拿到靠譜又漂亮的結果、需要我們不斷優化實驗條件,包括裂解液的選擇、抗體的選擇、Protein A與G的選擇和使用量、beads的選擇等。

小編收集了以下常見的免疫(共)沉淀需注意點:

1.   細胞裂解采用溫和的裂解條件,不能破壞細胞內存在的蛋白質-蛋白質相互作用,多采用非離子變性劑(NP40 或Triton X-100)。每種細胞的裂解
      條件是不同的,需要通過經驗和試驗確定。不能用高濃度的變性劑(0.2%SDS),細胞裂解液中要加各種酶抑制劑。

2.  免疫(共)沉淀需要注意點就是抗體的性質。抗體不同、其和抗原的結合能力也不同,WB、IHC能結合未必能用在IP反應。建議仔細檢查抗體的
     說明書。特別是多抗的特異性是問題。

3.  需充分考慮抗體/緩沖液的比例。抗體過少則不能檢出抗原,過多則不能沉降在beads上,殘存在上清。緩沖劑太少則不能溶解抗原,過多則抗原
     被稀釋。

4.  如果拿到免疫復合物后用WB檢驗,必須在實驗前預測目的蛋白是什么,以選擇后檢測的抗體,若預測不正確,實驗就得不到結果,實驗本身具有
     冒險性。

 

那么做CoIP,我們需要拿到怎樣的實驗驗證結果、從而有效證明我們的猜測呢?

Figure from INMAP Overexpression Inhibits Cell Proliferation, Induces Genomic Instability and Functions through p53/p21 Pathways , Zhu Y et al.PLoS One. 2015 Jan 30;10(1)

 

上圖是CoIP驗證實驗的典型結果圖片。INMAP是一個在有絲分裂中起重要作用的蛋白,保證了紡錘體和端粒的完整性,作者通過CoIP驗證研究了INMAP通過P53/P21途徑起作用。

文章的C和D圖中,研究者分別使用Flag單抗和p21抗體,拉下目的蛋白及其互作蛋白后,通過Input的陽性、control組normal lgG的陰性和終WB分析互作蛋白的陽性,充分驗證、結論令人信服!

 

所以,命中注定的愛情、果然還是需要經過層層考驗驗證吶!

 

愛必信作為一個致力于為中國科研事業服務的中國品牌,我們開發的明星爆款產品免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒采用蛋白特異結合能力*的ProteinA、ProteinG為捕獲載體,目的蛋白捕獲能力高,試驗結果重復性和一致性均得到有效驗證。

 

abs955 免疫(共)沉淀(IP/CoIP)試劑盒組分如下:

試劑組分包裝規格
Lysis buffer30ml*1
10*Wash buffer50ml*1
1*SDS 樣品緩沖液1ml*1
Protein A 瓊脂糖珠250μl*1
Protein G 瓊脂糖珠250μl*1

我們的產品優勢:

1. 采用Protein A、Protein G作為捕獲載體,更加節省抗體;

3. 主要輔助試劑均包含在內,一站式解決IP/CoIP實驗煩惱;

5. 高性價比,足夠實驗50次!

 2. 試劑盒內組分及操作流程經實驗優化,確保更高的檢測靈敏度;
4. 實驗結果重復性好;


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   貨號   產品名稱   規格   原價   *   貨期
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