愛必信(Absin)梯度凝膠優點介紹
更新時間:2017-04-01 點擊次數:2200
梯度凝膠電泳不是在單一濃度(孔徑)的凝膠上進行,而是形成梯度凝膠。從凝膠頂部到底部丙烯酰胺的濃度呈梯度變化。凝膠梯度是通過梯度混合器形成的,高濃度的丙烯酰胺溶液首先加入到玻璃平板中,而后溶液濃度呈梯度下降,因此在凝膠的頂部孔徑較大,而在凝膠的底部孔徑較小。梯度凝膠電泳也通常加入SDS,并有濃縮膠。電泳過程與SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳基本類似。
與單一濃度的凝膠相比,梯度凝膠有幾個優點:
① 首先,梯度凝膠比單一濃度凝膠的分離范圍更寬,可以同時分離較大范圍分子量的蛋白質。單一凝膠電泳對于分子量超過其分離范圍的蛋白質,過大或過小,都不能分離。而梯度凝膠孔徑范圍比單一凝膠大,分子量較大的蛋白質可以在凝膠頂部大孔徑部分得到分離,而分子量較小的蛋白質可以在凝膠底部小孔徑部分得到分離,所以分子量較大和較小的蛋白質可以同時得到分離。例如用4%~30%的梯度膠可以分離分子量5萬~200萬的蛋白質。
② 另一個優點是梯度凝膠可以分辨分子量相差較小,在單一濃度凝膠中不能分辨的蛋白質。電泳過程中,蛋白質在梯度凝膠中遷移,經過的孔徑越來越小,直到凝膠的孔徑不能通透,這樣電泳過程中蛋白質就被濃縮,集中在一個很窄的區帶中。而分子量略小的蛋白質可以遷移得更靠前一些,被集中在略前面的區帶中。由于梯度凝膠孔徑逐步變小,在蛋白質不能通透的孔徑附近對蛋白有濃縮作用,所以電泳后形成很窄的區帶,可以分辨出分子量相差較小的蛋白質。對于太稀的樣品,在電泳過程中可以將樣品分幾次加樣,大小不同的蛋白質分子zui終都會滯留在其相應的凝膠孔徑中而得到分離。
③ 可以直接測定天然狀態蛋白質的分子量而不需要解離為亞基,因此這一方法可以與SDS-PAGE測定分子量的方法互為補充。